Незважаючи на те, що стафілококи належать до числа найбільше виявля_ легко й розпізнаваних мікроорганізмів, що не вимагають складних діагностичних прийомів для їхнього виявлення, у практичній роботі мікробіологи дотепер зазнають певних труднощів при встановленні їхньої причинної ролі в ряді різних захворювань. З одного боку, присутність патогенних стафілококів, що виявляється в досліджуваному матеріалі, не завжди є переконливим доказом їх етиологического значення. З інший, з огляду на велику розмаїтість проявів біологічної активності цих мікробів, що залежить від різних, що не завжди піддаються обліку факторів, широку їхню мінливість під впливом лікарських речовин і самого макроорганізму, досить складно буває визначити їхню потенційну патогенність. Нарешті, третя причина пов’язана з тим, що стафілококи є представниками нормальної мікрофлори із групи умовно патогенних мікроорганізмів і, поряд з непатогенними, патогенні представники живуть в організмі людей, поширюючись при цьому досить нерівномірно на різні ділянки людського тіла.

Якщо виділення патогенного стафілокока, із крові хворих людей і різних порожнин, які прийнято вважати стерильними, у переважній більшості випадків може бути доказом його ролі як збудника хвороби, то присутність стафілококів на слизових зева, носа й т. д. навіть при явному хворобливому стані їх вимагає великої обережності дослідника у висновках про етиологии даних захворювань.

Тому, природно, не може бути загальних рекомендацій, як при діагностиці різних стафилококкових інфекцій, так і при мікробіологічних дослідженнях ділянок тіла людини й різних об’єктів зовнішнього середовища. Широкий обмін думками між мікробіологами наукових установ і практичних лабораторій, здійснюваний на з’їздах і конференціях, присвячених проблемам стафилококкових інфекцій, а також при особистих контактах, здавалося б, повинен був привести до певних поглядів на різні методи дослідження, пропоновані для виділення й ідентифікації стафілококів. Однак велика кількість запитів, що надходять із лабораторій СЕС і лікувальних установ, свідчить про явні утруднення, які виникають у дослідників при рішенні різних питань мікробіологічної діагностики стафілококів, а в ряді мікробіологічних установ існують ще деякі застарілі методи й прийоми, що приводять до неправильних оцінок і навіть прикрих непорозумінь.

Важливою умовою ефективності лабораторної діагностики є сочетанное визначення якісних і кількісних критеріїв змісту патогенних стафілококів у досліджуваному матеріалі. Виходячи із цього, я вважаю за необхідне викласти ряд методів основних мікробіологічних досліджень, найбільш простих і доступних для кожної практичної й наукової лабораторії, якими ми користуємося протягом багатьох лет.

ОСНОВНІ ПРИНЦИПИ ВИЯВЛЕННЯ Й ІДЕНТИФІКАЦІЇ ПАТОГЕННИХ СТАФІЛОКОКІВ

Попередня діагностика стафілококів може ґрунтуватися на бактериоскопическом вивченні препаратів - мазків, пофарбованих по Граму. Патогенні стафілококи, крім гроздевидного розташування, характеризуються правильною сферичною формою клітин. Виявлення стафілококів, що перебувають усередині клітин, дозволяє дати відповідь про наявність стафилококковой інфекції. У більшості ж випадків для точного встановлення патогенності виявлених стафілококів потрібно виділити ці мікроорганізми в чистій культурі шляхом посіву досліджуваного матеріалу на щільні живильні. середовища

У цей час асортименти диференціальних, елективних і накопичувальних середовищ, запропонованих для виділення патогенних стафілококів, досить значний і продовжує розширюватися. Багато дослідників на основі знання основних біохімічних характеристик і живильних потреб патогенних стафілококів при конструюванні середовищ прагнуть підвищити їх висеиваемость і забезпечити можливість здійснювати їхній кількісний облік, одержати надійний спосіб відрізняти потенційно хвороботворні стафілококи від сапрофітів.

Уживання рідких накопичувальних середовищ для первинного виділення стафілококів недоцільно, тому що позбавляє дослідника можливості кількісної оцінки змісту мікробів в обстежуваних об’єктах, а при випадкових забрудненнях сприяє помилкам. Особливо це ставиться до таких досліджень, як виявлення носительства патогенних стафілококів, де доказом є лише масивний ріст, або визначення етиологической ролі цих мікроорганізмів "при харчових отруєннях або зовнішніх запальних процесах. Якщо ж мова йде про дослідження крові, а також про ті деякі випадки, коли буває необхідно виявити навіть одиничні життєздатні особини цих мікробів, наприклад при контролі ефективності дезінфекції, перевірці на стерильність або титрационних посівах, то в подібних випадках використання накопичувальних середовищ цілком виправдано.

З великого числа різноманітних живильних, середовищ випробуваних для первинного виділення стафілококів, у практиці виправдав, ;1′ себе деякі. Звичайний живильний агар (рН 7,2 7,4) , приготовлений шляхом додавання 2% агар-агару до мясопептонному бульйону або до триптическому перевару Хоттингера, може бути використаний при дослідженні екссудатов із закритих порожнин. Стафілококи виростають через 18—24 год інкубації при 37° С у виді гладких блискучих з рівними краями непрозорих і злегка опуклих колоній. Характер пігменту виявляється краще після додаткового добового витримування чашок при кімнатній температурі (20° С) на світлі. Якщо в досліджуваному матеріалі присутній стороння флора, то по зовнішньому вигляді колонії стафілококів можуть бути трудноотличими.

Уживання кров’яного агару дає можливість, крім виявлення пігменту, визначити й гемолитическую активність стафілококів. При цьому необхідно пам’ятати, що гемолитическая здатність, обумовлена на чашках із кров’яним агаром, залежить від багатьох факторів - виду крові, її концентрації, наявності в ній антитоксинів, товщини шаруючи середовища, змісту вуглекислого газу в атмосфері культивування, густоти посіву, присутності й характеру супутньої флори й т. д.

При доборі колоній із кров’яного агару необхідно отвивать як гемолитические, так і не дають гемолізу, особливо якщо дослідження проводиться на середовищі з людською або кінською кров’ю, а відсутність гемолізу на таких середовищах не дозволяє укласти про відсутність взагалі гемолитической активності. Тому використання кров’яного агару для первинного посіву доцільно тільки при обстеженні об’єктів, що не містять сторонньої мікрофлори, і бажано додавати в живильна кров середовище кролика або барана.

Якщо ж проводиться дослідження гноячи відкритих ран або відокремлюваного виразок або свищів, то варто користуватися елективно-диференціальним середовищем для стафілококів - желточно-сольовим агаром (ЖСА) Г. Н. Чистовича. Елективность цього середовища забезпечується високим змістом хлористого натрію, а доданий яєчний жовток дозволяє виявляти лецитовителлазную активність, що є одним з показників патогенності стафілококів і в силу цього ЖСА більш чітко диференціює патогенних представників, чим кров’яний агар. Готування ЖСА нескладно.

Заготовляють взапас і стерилізують в автоклаві при 120 °С" протягом 20 хв живильний агар (МПА або Хоттингера) рН 7,2—7,4, що містить 10% повареної солі. Перед уживанням сольовий живильний агар розтоплюють, остуджують до 45—50 °С и додають до нього 20% по обсязі стерильної желточной суспензії (1 жовток курячого яйця на 200 мол фізіологічного розчину) . Для кращого емульсування бажано мати колби зі скляним намистом. Після ретельного перемішування середовище розливають по 20-25 мол у чашки, які можуть зберігатися в холодильнику протягом декількох днів.

Варто робити масивний посів досліджуваного матеріалу на чашки із ЖСА, а інкубацію вести протягом 2 доби при 35—37° С. Стороння флора різко придушується, стафілококи ж на ЖСА виростають практично в чистій культурі. Безпосередньо при перегляді чашок навколо колоній відзначається утворення райдужних віночків і мутної зони - лецитовителлазная реакція. Такі колонії, не менш двох з кожного посіву, отвивают на скошений мясо-пептонний агар для наступної перевірки вирослих культур у реакції плазмо-коагуляции.

Pages: 1 2 3