Діагностика стафилококкових інфекцій | Довідник школяра – кращі шкільні уроки по всім предметам

Діагностика стафилококкових інфекцій

При цьому варто врахувати, що інтенсивність зони деполимеризации на щільному середовищі не завжди збігається з кількістю продукції цього ферменту в досліджуваних стафілококів у рідких середовищах.

Для виявлення фібринолізину використовують трохи вдосконалений метод Кристи із сотр.

Середовище Кристи-Чепмена має наступний склад: м’ясний екстракт-0,45 г, пептон-0,75 г, хлористий натрій-1,2 г, агар-2,75 г, вода-130 мол, рн середовища == 7,0. Стерилізується в автоклаві й зберігається взапас.

Перед досвідом середовище розтоплюють, остуджують до 50 °С и додають 15—20% стерильної цитратной людської плазми. Суміш прогрівається у водяній лазні при 65—70°С у плин 2— 5 хв до появи ясної каламуті, а потім розливається в чашки. Випробувані культури засівають “плямами” по 15—20 на чашку. Посіви инкубируют при 37 °С. Ураховується утворення зон просвітління навколо колонії спочатку через 14 год, потім через 24 і 48 год, тому що реакція в різних культур тече неоднаково швидко й у ряду штамів вона розвивається в більше пізній термін.

Фибринолитический тест ми вважаємо досить придатним для визначення потенційної хвороботворності стафілококів, але оцінюємо тільки в комплексі з іншими ознаками активності.

Гиалуронидазная активність визначається по методу Мак-Клина в модифікації М. Ш. Могилевского й Л. С. Коган (1949) .

Розчин гиалуроната дающий у присутності 2 N оцтові кислоти типовий згусток, розливається по 0,5 мол у стерильні пробірки. Додається 0,5 мол добової культури стафілокока в пептонной воді. Контролями служать: гиалуропат + дистильована вода й гиалуропат + незасіяне середовище. Суміші струшуються й видерживаются при 37 °С 15—20 хв. Потім у кожну пробірку додається по двох краплі 2 N розчини оцтової кислоти й струшується. У контролях повинен утворитися слизова грудочка. У досвіді при наявності гиалуронидази він відсутній, що свідчить про деполимеризации гиалуроновой кислоти мікробним ферментом.

Для вивчення токсигенности стафілококів зручно користуватися методом, запропонованим Илеком і Леви (1950) , що дозволяє визначити типи гемолизинов.

Із цією метою готуються чашки з живильним агаром, що містить 5% відмитих фізіологічним розчином еритроцитів барана, кролика й людину.

На поверхню живильного по середовища діаметру поміщають стерильну смужку фільтрувального паперу, змочену альфа-антитоксичною сироваткою. Відступивши 1—2 мол від краю смужки, перпендикулярно до неї засівають штрихами досліджувані культури. Посіви инкубируют при 37 °С у плин доби, після чого враховують результати.

Альфа-гемоліз проявляється у вигляді повного просвітління середовища навколо штриха культури й нейтралізується альфа-антитоксичною сироваткою. Він виявляється на середовищах із кролячими й баранячими еритроцитами Бета-гемоліз на агарі з баранячою кров’ю дає часткове просвітління, зона якого має бурувато-пурпурний відтінок. Це “тепло^-холодовий” токсин і краще виявляється після додаткового добового витримування чашок у холодильнику при температурі +4 °С по характерному пошаровому гемолізі баранячих еритроцитів і не централізується альфа-антитоксичною сироваткою. На кролячих еритроцитах він не активний. Дельта-гемолизин визначається по вузькій смужці гемолізу баранячих і кролячих еритроцитів, не нейтралізується альфа-антитоксичною сироваткою. Однак утворення дельта-гемоли-зина на цих чашках може бути замасковано дією альфа-токсину й тому його варто перевіряти на середовищах з еритроцитами людини або коня. Таким чином, для визначення всіх 3 типів гемолизинов досить використовувати еритроцити барана й людини або коня.

Для визначення вірулентності стафілококів існують кілька різних методів зараження білих мишей.

Найбільш простим є введення 0,1 мол добової бульйонної культури випробуваного стафілокока у хвостову вену. Облік загибелі тварин здійснюється протягом 10 доби, реєструють наявність абсцесів у бруньках.

Зручно користуватися способом Badenski і сотр. (1958) , Добова бульйонна культура центрифугируется при 3000 про/хв - 30 хв. Отриманий осад ресуспендируется в половинному обсязі декантата й у кількості 0,05 мол уводиться 6 мишам за очним яблуком в окологлазничную клітковину. Культуру, що викликає загибель половини й більше заражених мишей протягом 6 днів, уважають вірулентної.

При цих методах зараження вірулентною культурою у тварин розвивається громад септичний процес із переважною поразкою бруньок. Основна загибель мишеи відбувається на 3- 5-й день після зараження.

Інші способи зараження білих мишей (внутріочеревинний і интраназальний) вимагають у десятки разів більшої дози, що заражає, максимум загибелі мишей доводиться на 1- 2-е доба, що характеризує переважно токсичний компонент процесу (С. А. Анатолій, И. И. Антоновська, 1967) .

У той же час ряд дослідників віддають перевагу більше простому технічно внутріочеревинному способу зараження мишей, що одночасно дозволяє вивчати клітинні й гуморальні механізми розвитку інфекції.

Зіставлення вірулентності стафілококів для білих мишей з окремими факторами їхньої патогенності показало, що вірулентність штамів, по даним великої кількості дослідників, корелює з рівнем альфа-гемотоксина. Що стосується інших ознак патогенності і їхньої кореляції з вірулентністю, те отримані суперечливі відомості. Так, за даними С. А. Анатолія (1969) , вірулентність штамів корелювала із продукцією бета-гемолизина, летального фактора, лецитовителлази, гиалуронидази й коагулази. А. К. Акатов (1968) не відзначає кореляції вірулентності з коагулазной, лециговител-лазной, фибринолитической активністю, не встановлена кореляція з дельта-токсигенностью.

Для порівняння вірулентності стафилококкових культур можна використовувати їхню здатність викликати дермонекротическую реакцію в кроликів.

Готовлять 4-мільярдну суспензію добової агарової культури стафілокока у фізіологічному розчині, а з отриманої густоти роблять розведення, щоб одержати 2-2- і 1-мільярдні суспензії. З кожного розведення в обсязі 0,1 мол, що становить 100,200,400 мільйонів мікробних тіл, уводять кроликові у вистрижену або депилированную напередодні шкіру. На одному кролику можна одночасно поставити до 8 внутрішкірних проб. Щодня відзначають прояву дермонекротической реакції, а остаточно на 4-е доба. За мінімальну дермонекротическую дозу приймають ту найменшу кількість культури, що дає некроз на 4-е доба (Г. В. Вигодчиков, 1963) .

Pages: 1 2 3

Збережи - » Діагностика стафилококкових інфекцій . З'явився готовий твір.

Діагностика стафилококкових інфекцій





Шкільні предмети. Шкільна фізика. Уроки з англійської, французької, німецької мов.